緩沖液的作用原理（什么叫緩沖溶液?什么是緩沖作用）
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添加時(shí)間：2022-11-25 瀏覽次數(shù):1616
PCR是體外合成雙鏈DNA的一種方法，類似于DNA片段復(fù)制擴(kuò)增，其特異性主要來(lái)源于特異性引物和特異性DNA聚合酶（Taq酶）。
試劑準(zhǔn)備一般為：DNA模板、特異性引物、dNTP、PCR Buffe、Taq酶。按照試劑盒和說(shuō)明書配制反應(yīng)體系和設(shè)置擴(kuò)增程序，反應(yīng)結(jié)束電泳鑒定。
實(shí)驗(yàn)室常用的Tris系列緩沖液：三羥甲基氨基甲烷（Tris）是一種應(yīng)用廣泛的有機(jī)物，化學(xué)式為C4H11N03,白色結(jié)晶顆粒。Tris及其衍生物常用于生化實(shí)驗(yàn)中緩沖液的制備，尤其是核酸和蛋白質(zhì)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)中都需要用到它作為生物緩沖劑。作為弱堿性的緩沖試劑在配制大范圍PH值的緩沖液中有很大的優(yōu)勢(shì)，并且不與Ca、Mg離子等重金屬離子反應(yīng)發(fā)生沉淀，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾很小。
Tris系列緩沖液包括：TBS緩沖液、TBST緩沖液、TE緩沖液、TAE緩沖液、TBE緩沖液。今天主要介紹TE緩沖液和TAE緩沖液。
TE緩沖液：是Tris-HCL緩沖液+EDTA,一般用作溶解劑或保持劑，對(duì)DNA的堿基有保護(hù)作用，被用于DNA的穩(wěn)定和儲(chǔ)存。
TAE緩沖液：是使用最廣泛的緩沖液系統(tǒng)，雙鏈DNA在其中的遷移率較快，回收DNA片段時(shí)經(jīng)常用TAE系統(tǒng)進(jìn)行電泳。
常規(guī)的TAE緩沖試劑一般為瓶裝的50×TAE濃縮液，每次使用時(shí)需要配成1×的來(lái)使用，而且運(yùn)輸途中保存較困難，影響液體的穩(wěn)定性。
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